Материалы

ВВЕДЕНИЕ

Обнаружение и дифференцирование простейших (отличие патогенных форм от непатогенных) — довольно сложная задача. Большинство одноклеточных организмов в кале обнаруживают в двух формах: вегетативной (стадия трофозоита) — активной, подвижной, жизнедеятельной, легко поддающейся вредным воздействиям (в частности, охлаждению) и потому быстро погибающей после выделения из кишечника, и в виде устойчивых к внешним воздействиям цист (ооцист). В оформленном кале простейшие, как правило, обнаруживают лишь в инцистированном состоянии; для обнаружения вегетативных форм необходимо исследовать кал еще в тёплом состоянии. Это обусловлено тем, что в остывшем кале вегетативные формы простейших быстро гибнут и мертвыми быстро поддаются действию протео-литических ферментов, вследствие чего теряют характерные особенности своей структуры. Кроме того, при остывании уменьшается, а затем исчезает подвижность простейших — важный вспомогательный фактор при их дифференцировании.

В фекалиях можно выявить 20 видов простейших (8 патогенных и условно-патогенных и 12 комменсалов). Простейшие кишечника обитают в тонкой или толстой кишках в стадии трофозоита и/или цисты. Они относятся к одной из 4 групп: амёб, жгутиковых, реснитчатых и кокцидий. Основными и наиболее значимыми простейшими, вызывающими заболевания у человека, являются лямблии, дизентерийная амёба и балантидий.
 

Подготовка к анализу

Накануне анализа нужно исключить прием слабительных средств и продуктов, вызывающих разжижение стула. Не следует в течение двух суток до анализа применять ректальные свечи, масла и лекарственные препараты для стимуляции перистальтики кишечника. Не принимать в пищу красящие продукты и лекарства.

Взятие биоматериала

• дуоденальное зондирование. Использование специального зонда, который вводится через пищевод и достигает двенадцатиперстной кишки, желчных протоков. С целью забора материала желудочного сока и желчи;
• анализ кала на определение цисты. Лабораторное исследование утренних выделений пациента на наличие цист, яиц и самих особей паразитов;
• ректороманоскопия.

Часто проводят взятие биоматериала при подозрении на паразитов и при симптомах, которые они вызывают. Назначают при геморрое, выпадении прямой кишки. Если у пациента стул со слизью и кровяными выделениями. Процедура проводится с использованием специального прибора, состоящего из металлической трубки, аноскопа, осветительной лампочки и других вспомогательных элементов, которые вводятся в анальное отверстие для осмотра.
И только после подтверждения класса и вида паразита врач назначит препараты, соответствующие стадии и продолжительности приобретенного на фоне гельминтов заболевания.

Из-за подверженности вегетативных форм простейших вредным воздействиям, в т.ч. охлаждению, они обнаруживаются в кале только до его остывания (при охлаждении погибают), т.е. примерно 20 минут после сбора материала. Если исследование проводится в более поздние сроки, то анализ выявит только цисты простейших.

Понятие «циста» обычно характерно для описания жизненного цикла некоторых видов бактерий, протистов, и многих одноклеточных. Применимо оно для самого микроорганизма в покоящейся форме и для защитной оболочки, которая образуется как в неблагоприятные моменты, так и в определенный период размножения.

Правила сбора каловых масс

• Каловые массы должны быть выделены естественным образом, без использования каких-либо слабительных препаратов и клизм.
• Свежесть собранного биологического материала напрямую влияет на точность результата. С момента сбора должно пройти не более 6 часов.
• Огромное значение имеет диета, которую необходимо соблюдать в течение 3-5 дней до сбора биоматериала. Для этого нужно отказаться от жирной и тяжелой пищи, исключить употребление сладких, газированных и алкогольных напитков.
• Отменить прием лекарственных препаратов и активированного угля.
• Непосредственно перед сбором кала необходимо помочиться, принять гигиенические процедуры и тщательно удалить следы влаги.
• Сдается утром.
• Еще одно требование – не надо подмываться.
• После акта дефекации проводится забор с помощью ложечки и специальной тары, которую можно приобрести в любой аптеке.
• Собирается небольшое количество кала около двадцати грамм.
• Материал для анализа нужно доставить как можно быстрее в герметично укупоренной таре. Затем кал исследуют в лаборатории поликлиники.
• Следует отметить, что время после акта дефекации до того, как кал сдают в лабораторию, не должно превышать двух часов.

Для обнаружения цист простейших в кале предполагаемого больного, как правило, используются методы микроскопического исследования.

Цистные формы, которые можно найти в каловых массах:

• реснички (реснитчатые);
• споровые;
• корненожки;
• инфузории;
• жгутики (жгутиковые)
• кишечные кокцидии (криптоспоридии).

Наиболее распространённые патогенные микроорганизмы, встречающиеся в цистовой форме: Entamoeba coli (энтамёба коли, кишечная амёба), Chilomastix mesnili (хиломастикс), Lamblia intestinalis (лямблия), Entamoeba histolytica (дизентерийная амёба).

Копропротозооскопия (исследование фекалий на кишечные простейшие)

Метод нативного мазка с физраствором и раствором Люголя

Необходимые реактивы и оборудование
1. Физиологический раствор
2. Раствор Люголя 1 %-ный
3. Буферный раствор метиленового синего
4. Уксусно-кислый спиртовой раствор йода
5. Предметные и покровные стекла
6. Деревянные палочки
7. Стеклянные пипетки
8. Стерильная стеклянная или пластиковая посуда (для забора фекалий)
9. Микроскоп
Подготовка к работе
Для исследования выбирают в первую очередь неоформленные фекалии, участки слизи или прожилки крови в кале.
Фекалии исследуют теплыми, т.е. не позднее 15 - 20 мин после дефекации, когда возможно обнаружение подвижных вегетативных форм (трофозоитов) простейших (время можно увеличить до 45 мин и до 1 ч, если фекалии сохранялись это время в холодильнике при температуре 4 - 5 °С).
Физиологический раствор подогреть до 36 - 37 °С.
Приготовление маточного 5 %-ного раствора Люголя: 10 г иодида калия растворить в 30 мл дистиллированной воды + 5 г кристаллического йода, размешать до полного растворения и долить до 100 мл дистиллированной водой. Хранить после приготовления в склянке из темного стекла.
Приготовление рабочего 1 %-ного раствора Люголя: 5 мл маточного 5 %-ного раствора Люголя соединить с 20 мл физиологического раствора, хорошо перемешать. Хранить в склянке из темного стекла не более 14 дней.
Приготовление буферного метиленового синего: 50 мл дистиллированной воды + 46,3 мл раствора уксусной кислоты (1,2 мл ледяной уксусной кислоты + 98,8 мл дистиллированной воды) + 3,7 мл раствора уксуснокислого натрия (1,6 г уксуснокислого натрия + 100 мл дистиллированной воды) + 0,5 г метиленового синего. Приготовленный раствор хорошо перемешивается, настаивается 15 мин и фильтруется.
Приготовление уксусно-кислого спиртового раствора йода: 10 мл спиртового раствора Люголя (40 мл 70 %-ного этилового спирта + несколько кристаллов йода, хорошо перемешать, раствор должен иметь цвет "крепкого чая") + 10 мл 25 %-ного раствора уксусной кислоты.
Ход исследования
- Нанести на предметное стекло 1 каплю изотонического теплого (36 - 37 °С) раствора в левой половине и 1 каплю 1 %-ного раствора Люголя в правой половине предметного стекла.
- Выбрать из пробы фекалий деревянной палочкой патологические примеси или немного фекалий (с булавочную головку) и перенести в каплю физраствора и растереть до получения равномерной негустой эмульсии, а затем поместить в каплю с Люголем и также растереть.
- Накрыть капли покровным стеклом (через правильно приготовленный мазок можно видеть газетный шрифт).
- Микроскопировать при увеличении: сначала - объектив ×8 или ×10, окуляр ×10, затем объектив ×40, в т.ч. для дифференциальной диагностики амеб и жгутиковых, включая лямблии и диэнтамебу.
Примечания.
1. Для дифференциальной диагностики трофозоитов дизентерийной амебы с непатогенными амебами необходимо приготовить препарат с буферным раствором метиленового синего: нанести на предметное стекло большую каплю буферного раствора метиленового синего, в нее внести деревянной палочкой небольшое количество слизи, фекалий с прожилками крови, накрыть покровным стеклом, дать постоять 5 - 10 мин, чтобы краска проникла в трофозоиты, и сразу микроскопировать для исключения перекрашивания трофозоитов.
Результат окрашивания: трофозоиты амеб окрашиваются в разные оттенки синего - ядро синее, цитоплазма голубая, эритроциты синие. Цисты амеб, трофозоиты, цисты жгутиковых и ооцисты кокцидий не окрашиваются.
2. Для выявления ооцист кокцидий: при выполнении вышеописанной методики приготовления нативного мазка с физраствором и 1 %-ным раствором Люголя, в одну из капель вместо 1 %-ного р-ра Люголя вносится капля уксусно-кислого спиртового раствора йода. Палочкой внести небольшое количество фекалий, растереть, накрыть покровным стеклом; микроскопировать при тех же увеличениях. Ооцисты изоспоры выявляются, благодаря хорошей окраске ядер.
Эффективность метода
- Позволяет выявлять вегетативные формы патогенных простейших и комменсалов, анализировать тип их движения (что имеет важное значение при видовой идентификации простейших, особенно жгутиковых).
- Диагностика амебиаза эффективна только при строгом соблюдении стерильного забора фекалий и микроскопического исследования не позднее 15 - 20 мин после дефекации.
- Позволяет определять видовые признаки цист амеб и жгутиковых, ооцист кокцидий, благодаря эффективной окраске йодом ядер, жгутикового аппарата, гликогена.
Применение метода
- Применяется для диагностики кишечных протозоозов: лямблиоза, балантидиаза, амебиаза, кокцидиоза (изоспороза).
- Для исследования на кишечные простейшие, в т.ч. на лямблии используются также методы: формалин-эфирного (уксусно-эфирного) осаждения и исследование дуоденального содержимого (см. описание методик в п. 4.2.1.2, 4.2.1.3, 5.1).
Примечание. В нативных препаратах с физиологическим раствором при интенсивной инвазии также можно обнаружить яйца гельминтов и личинки стронгилоидеса.

Комплексный метод исследования фекалий на кишечные простейшие и гельминты из консерванта

Универсальный метод диагностики кишечных паразитозов, вызываемых простейшими (амебы, жгутиковые, в т.ч. диентамеба, балантидии и кокцидий) и гельминтами (нематоды, трематоды и цестоды).
В основе метода лежит "диагностическая система" КТ-ФЭО-МЦН: консервант Турдыева, формалин-эфирное обогащение, модифицированный метод окраски Циля-Нильсена.
Принцип метода: отбор проб фекалий производят в консервант Турдыева (п. 2.1.1), где паразиты фиксируются, и морфологические признаки простейших, яиц и личинок гельминтов сохраняются неизменными длительное время, это обеспечивает дальнейшее исследование материала из единой пробы:
- методом влажного мазка из консерванта;
- методом мазка из осадка после эфир-формалинового обогащения консервированного материала;
- модифицированным методом окрашивания по Цилю-Нильсену мазка из осадка после обогащения материала из консерванта.
Эффективность комплексного метода
- Выявляет весь спектр кишечных паразитов, в т.ч. редко диагностируемых простейших (диэнтамеба, изоспора), яиц и личинок гельминтов, не требующих специальных методов исследования (например, культивирования и т.п.) включая возбудителей оппортунистических инвазий (кокцидий, стронгилоидес).
- Повышается выявляемость сочетанных инвазий.
Условия отбора материала: максимально быстро после дефекации с помощью деревянной палочки фекалии переносят в стерильный флакон с консервантом Турдыева (п. 2.1.1), если фекалии оформленные, то количество должно быть в объеме с лесной орех, если жидкие - объемом с чайную (столовую) ложку. Соблюдая соотношение: 3 части консерванта и 1 часть фекалий. Флакон закрывают крышкой, предварительно тщательно размешав фекалии деревянной палочкой до гомогенной суспензии.

Метод влажного мазка из консерванта

Необходимое оборудование и реактивы
1. Консервант Турдыева
2. Раствор Люголя 1 %-ный
3. Предметные и покровные стекла
4. Деревянные палочки
5. Микроскоп
Ход исследования
- На предметном стекле готовятся два препарата: пипеткой из консерванта с фекалиями, очень осторожно, не взбалтывая содержимое флакона, нанести две капли придонного осадка (в правой и левой части стекла).
- Растереть деревянной палочкой.
- В одну из капель добавить каплю раствора Люголя 1 %-ного.
- Каждую каплю накрывают покровным стеклом (покровные стекла можно окантовать вазелином для предотвращения высыхания и смещения покровного стекла).
- Микроскопируют при увеличении: объектив ×8 или ×10, окуляр ×7 или ×10, затем объектив ×40 (в отдельных случаях, например для криптоспоридий, применяют увеличение объектива ×90 или ×100 и микроскопируют с масляной иммерсией).
Эффективность метода
- Эффективен для выявления цист и трофозоитов простейших, включая редко выявляемую диентамебу, а также яиц и личинок гельминтов.
Применение метода
- Для диагностики кишечных протозоозов.
Примечание. Ооцисты при достаточном количестве обнаруживаются в верхнем слое мазка непосредственно под покровным стеклом по эффекту негативного окрашивания раствором Люголя.

Метод исследования материала из консерванта формалин-эфирным обогащением

Необходимое оборудование и реактивы
1. Физиологический раствор
2. Раствор Люголя 1 %-ный
3. Этиловый эфир
4. Раствор формалина 10 %-ный нейтральный (для нейтрализации - во флакон темного стекла с раствором формалина на дно слоем в 1 - 2 см насыпать порошкообразный углекислый кальций)
5. Палочки деревянные
6. Центрифужные градуированные пробирки
7. Воронки стеклянные
8. Бинт (марля)
9. Стекла предметные и покровные
10. Пипетки стеклянные
11. Пробки резиновые
12. Центрифуга
13. Микроскоп
Ход исследования
- Перенести пипеткой в центрифужную пробирку осадок фекалий со дна флакона с консервантом в объеме 1,5 - 2 мл.
- Добавить 6 - 7 мл 10 %-ного нейтрального формалина.
- Закрыть пробирку резиновой пробкой и тщательно перемешать, энергично встряхивая пробирку в течение 5 с.
- Полученную взвесь перелить в другую центрифужную пробирку через стеклянную воронку с двухслойным бинтом (марлей).
- Добавить 2 - 3 мл этилового эфира.
- Закрыть пробирку пробкой и энергично встряхивать в течение 30 с.
- Убрать пробку и дать постоять пробирке в течение 2 мин в вытяжном шкафу.
- Затем центрифугировать 2 мин при 1500 об/мин или 1 - 1,5 мин при 3000 об/мин.
- Отделить палочкой образовавшуюся "каловую пробку" от стенок пробирки.
- Перевернуть пробирку дном вверх и вылить содержимое (можно ватным тампоном обтереть стенки пробирки, чтобы жидкость не стекала на дно и не увеличивала объем осадка), пробирку поставить в штатив.
- На предметное стекло по обе стороны от центра нанести по капле физиологического раствора и раствора Люголя.
- Перенести в каждую каплю осадок из центрифужной пробирки, размешать деревянной палочкой и накрыть каждую каплю покровным стеклом.
- Микроскопировать при увеличении: объектив ×8 или ×10, окуляр ×7 или ×10, затем с объективом ×40 (при необходимости использовать окуляр ×90 или ×100 с масляной иммерсией).
Применение метода
- Для диагностики цист кишечных простейших и яиц гельминтов.

Модифицированный метод окрашивания по Цилю-Нильсену мазков из осадка после обогащения консервированного материала

Необходимые реактивы и оборудование
1. Смесь Никифорова
2. Серная кислота 10 %-ная
3. Фуксин основной
4. Фенол
5. Палочки деревянные
6. Предметные стекла
7. Химические стаканчики или "мостики" для окрашивания мазков
8. Стеклянные пипетки
9. Кюветы эмалированные
10. Микроскоп
Ход исследования
- На предметное стекло нанести пипеткой каплю осадка из центрифужной пробирки после обогащения (п. 4.2.4.2.2) и круговым движением палочки приготовить мазок (можно добавить каплю физиологического раствора, чтобы мазок не был густым).
- Высушить на воздухе (тщательно).
- Фиксировать мазок в смеси Никифорова в течение 20 - 30 мин.
- После фиксации мазок высушить на воздухе.
- Окрашивать мазок в растворе карболового фуксина (приготовление в п. 4.2.4.4), поместив мазок в химический стаканчик с этой краской на 45 мин!
- Промыть мазок проточной водой.
- Обесцветить мазок в 10 %-ном растворе серной кислоты до прекращения отхождения розовых "облачков" красителя.
Промыть тщательно проточной водой.
- Подкрасить мазок 5 %-ным раствором малахитового зеленого, приготовленного на 10 %-ном этиловом спирте в течение 2 - 5 мин.
- Промыть мазок в воде.
- Высушить мазок на воздухе.
- Микроскопировать при увеличении: окуляр ×10, объектив ×90 или ×100 с масляной иммерсией.
Применение метода
- Для выявления ооцист кокцидий, включая криптоспоридии и изоспоры.
Эффективность
- Предварительная фиксация в консерванте и обогащение осаждением повышает выявляемость ооцист по сравнению со стандартной методикой диагностики ооцист кокцидий, включая криптоспоридии и изоспоры.

Метод Бермана в модификации для исследования на балантидиаз

Необходимые реактивы и оборудование
1. Дистиллированная вода
2. Химические стаканчики
3. Палочки деревянные
4. Чашки Петри
5. Пробирки центрифужные
6. Центрифуга
7. Микроскоп
Ход исследования
- В химический стаканчик или в чашку Петри положить порцию фекалий 10 - 15 г (величиной с орех), предварительно перемешав фекалии.
- Залить теплой (45 °С) дистиллированной водой, чтобы фекалии были полностью покрыты.
- Через 1,5 - 2 ч слить жидкость в центрифужные пробирки.
- Центрифугировать 2 мин при 1500 об/мин.
- Надосадочную жидкость слить, осадок с помощью стелянной пипетки перенести на предметное стекло (по 2 капли на каждое стекло), накрыть покровными стеклами.
- Микроскопировать при увеличении: объектив ×10, окуляр ×10; для уточнения морфологических особенностей: объектив ×40; окуляр ×10.
Эффективность метода
- Позволяет выявлять трофозоиты балантидий при низкой интенсивности инвазии.
Применение метода
- Для диагностики балантидиаза.

Методы окрашенных мазков на криптоспоридиоз

(по Цилю-Нильсену; Романовскому-Гимзе)
Необходимые реактивы и оборудование
1. Реактивы: фуксин основной, этиловый спирт, фенол, раствор серной кислоты 7 %-ный (5 - 10 %-ный), раствор малахитовой зелени 5 %-ный в 10 %-ном этиловом спирте, водный раствор метиленового синего 0,2 %-ный, раствор малахитового зеленого 5 %-ный, азур-эозин по Романовскому-Гимзе 10 %-ный раствор, флотационные растворы
2. Предметные стекла
3. Стеклянные или деревянные палочки
4. Горелка (спиртовка)
5. Кюветы эмалированные
6. Мостики стеклянные или "контейнеры" для окраски мазков
7. Пипетки, стеклянные капилляры
8. Груши резиновые
9. Химические стаканчики
10. Центрифужные пробирки объемом 15 мл
11. Металлические петли
12. Центрифуга
13. Микроскоп
Подготовка к работе
Приготовление рабочего раствора краски по Цилю-Нильсену
- Фуксина основного 2 г растворить в 12 мл спирта 96°-ного.
- Фенола 5 г растворить в 50 мл дистиллированной воды.
- Слить вместе растворы фуксина и фенола, долить дистиллированной воды до 100 мл, перемешать.
Подготовка материала для исследования
Из фекалий приготовить мазок одним из следующих способов.
А) Нативный мазок
- Нанести на предметное стекло небольшое количество фекалий
- Растереть фекалии тонким слоем (при необходимости к комочку фекалий добавляют 1 - 2 капли физиологического раствора или воды)
- Тщательно высушить мазок на воздухе (не менее 30 мин)
Б) Обогащение флотационным методом
- Приготовить флотационный раствор (в качестве флотационного раствора использовать насыщенный раствор хлористого натрия или насыщенный раствор сульфата цинка - 331 г сульфата цинка на 1 л водопроводной воды)
- Разбавить фекалии водой, размешать
- Процедить разбавленные фекалии через 2-слойный бинт в центрифужную пробирку
- Центрифугировать при 1500 об/мин в течение 3 - 4 мин
- Удалить супернатант (объем оставшегося осадка не должен превышать 1 мл)
- Добавить флотационную жидкость до половины объема пробирки
- Размешать содержимое пробирки стеклянной палочкой
- Добавить флотационную жидкость до верхнего края пробирки
- Центрифугировать при 1500 об/мин в течение 3 - 4 мин
Собрать поверхностную пленку металлической петлей или стеклянным капилляром и поместить на предметное стекло
В) Обогащение методом седиментации
- Поместить в пробирку 0,5 - 1 г фекалий
- Залить 10 - 12 мл изотонического раствора хлорида натрия
- Перемешать содержимое пробирки до образования однородной суспензии
- Процедить суспензию через двойной слой марли в другую пробирку
- Центрифугировать
- Слить надосадочную жидкость
- Повторно залить осадок изотоническим раствором хлорида натрия
- Центрифугировать
- Слить надосадочную жидкость
- Перенести осадок пипеткой на предметное стекло
- Приготовить из осадка мазок
Ход исследования
Высушить мазки на воздухе (мазки, приготовленные одним из способов, описанных в п.п. А, Б, В).
- Фиксировать мазки в смеси Никифорова в течение 10 - 15 мин.
- Высушить на воздухе.
- Фиксированные и высушенные мазки быстро провести 3 - 5 раз над пламенем горелки.
- Поместить мазок в рабочий раствор карбол-фуксина на 5 - 10 мин.
- Промыть мазок водопроводной водой.
- Обесцветить мазок 7 %-ным раствором серной кислоты в течение 20 - 60 с.
- Промыть в воде.
- Подкрасить в течение 5 мин 5 %-ным раствором малахитовой зелени.
- Промыть в воде.
- Высушить на воздухе.
- Микроскопировать при увеличении: окуляр ×10, объектив ×90 или ×100 с масляной иммерсией.
Эффективность метода
- Метод окраски фиксированных мазков по Цилю-Нильсену считается одним из наиболее надежных для выявления ооцист криптоспоридий.
Результат: ооцисты криптоспоридий окрашиваются в разные оттенки ярко-красного цвета и имеют вид округлых образований диаметром около 5 мкм. Оболочка ооцист окрашивается фуксином неравномерно. Сопутствующая микрофлора окрашивается в зеленые цвета.
Применение метода
- Применяется для диагностики криптоспоридиоза.
Примечание. Для окрашивания фиксированных мазков можно применять и другие красители, например: Азур-эозином по Романовскому-Гимзе окрашивать от 10 до 30 - 45 мин в 10 %-ном растворе красителя при этом ооцисты не окрашиваются или слабо окрашиваются и имеют вид округлых образований, внутри ооцист (по периферии) могут быть в виде бледно-голубых удлиненных и слегка изогнутых телец (спорозоиты) с красноватыми гранулами внутри.

Морфологическая картина простейших при исследовании

Дизентерийная амёба

Entamoeba histolytica (дизентерийная амёба) вызывает у человека амёбиаз. Локализуется в толстой кишке, выделяется в форме трофозоита (с жидкими фекалиями) и/или цисты (в оформленном стуле). Вследствие того, что большинство видов амёб (кишечная, Гартмана, Бючли) для человека не патогенны, следует проявлять большую осторожность при оценке результатов исследования фекалий. Только обнаружение трофозоитов-гематофа-гов (тканевая форма Е. histolytica forma magna) может служить достоверным признаком наличия у пациента амёбной дизентерии и/или амёбного язвенного колита. Наличие в протоплазме амёб эритроцитов — очень важный диагностический признак, так как непатогенные формы амёб никогда их не содержат.
Во всех остальных случаях обнаружение Е. histolytica-подобных форм трофозоитов, не содержащих эритроцитов, не является основанием для диагноза амёбиаза как болезни. Аналогичным образом оценивают и результаты выявления только цист Е. histolytica (просветная форма), которые могут быть обнаружены у лиц, выздоравливающих от острого амёбиаза, у страдающих хронической формой амёбиаза и у носителей.

Лямблии

Lamblia intestinalis (лямблии) относится к классу жгутиковых. Лямблии паразитируют в тонкой кишке, преимущественно в двенадцатиперстной кишке, а также в жёлчном пузыре. Существование трофозоитов (вегетативная форма лямблий) требует жидкой среды, поэтому, попадая в толстую кишку, лямблии инцистируются, и в кале обнаруживают только цисты. Лишь при профузной диарее или после действия слабительных в испражнениях удаётся обнаружить вегетативные формы.

  

 
 

Балантидий

Balantidium coli. Балантидий — единственная ресничная инфузория, паразитирующая в кишечнике человека и вызывающая заболевания различной тяжести — от лёгких колитов до тяжёлых язвенных поражений. Возбудитель обнаруживают в фекалиях в форме трофозоитов или цист. Возможно носительство у здоровых людей. 

  
    
  

Криптоспоридии

Cryptosporidium. Представителей рода Cryptosporidium в настоящее время рассматривают как важнейших возбудителей диарей. Криптоспоридии (от греч. «скрытая спора») — облигатные паразиты, поражающие микроворсинки слизистых оболочек ЖКТ и дыхательных путей человека и животных. Инфекции ЖКТ, вызванные криптоспоридиями, зарегистрированы во всех странах мира. Такое широкое распространение криптоспоридиоза связано с большим количеством природных резервуаров инфекции, низкой инфицирующей дозой и высокой резистентностью возбудителя к дезинфицирующим веществам и противопаразитарным препаратам.

Среди криптоспоридий потенциально патогенными для человека видами являются Cryptosporidium parvum и Cryptosporidium felis (выявлены у ВИЧ-инфицированных). Наиболее типичная локализация инфекции у человека — дистальные отделы тонкой кишки. У пациентов с выраженными им-мунодефицитами может быть инфицирован весь ЖКТ — от ротоглотки до слизистой оболочки прямой кишки.

Диагностика криптоспоридиоза в большинстве случаев основана на обнаружении ооцист криптоспоридий в испражнениях и/или (значительно реже) в биоптате слизистой оболочки тонкой кишки при синдроме водянистой диареи. Используют микроскопию приготовленных препаратов, окрашенных по Граму. В большинстве случаев данный метод окраски не позволяет выявить ооцисты, вследствие их слабой способности удерживать краситель и невозможности отличить их от дрожжеподобных грибов. Поэтому применяют окраску на кислотоустойчивость. При таком методе окраски ооцисты криптоспоридий окрашиваются в красный или розовый цвет и хорошо видны на сине-фиолетовом фоне, в который окрашиваются другие микроорганизмы и содержимое кишечника.

При остром криптоспоридиозе количество ооцист в фекалиях велико, что позволяет легко их обнаружить при микроскопии окрашенных препаратов. Однако при хроническом криптоспоридиозе с лёгким течением, когда количество ооцист в кале мало, для повышения вероятности их обнаружения необходимо использовать методики обогащения. В последние годы для диагностики криптоспоридиоза стали часто использовать серологические методы.

Криптоспоридиоз желчевыводящих путей может проявляться холециститом, значительно реже гепатитом (с повышением концентрации билирубина, активности АСТ, АЛТ, щелочной фосфатазы в крови) и склеро-зирующим холангитом. Для диагностики билиарного криптоспоридиоза исследуют биоптаты печени и жёлчь, где можно обнаружить криптоспоридии в различных стадиях развития.

  
  

Определение в крови антител к паразитам

Паразитов, поразивших человека, не всегда можно обнаружить при помощи соскоба или анализа кала, так как они паразитируют не только в органах ЖКТ. Именно поэтому специалисты часто настаивают, чтобы пациенты с подозрительной симптоматикой сдавали кровь на антитела к паразитам.

Выделяют следующие факторы необходимости исследования крови на антитела к паразитам:

• Плановое обследование людей, проживающих в районах с высоким риском заражения;
• Подозрение на возможное наличие в организме гельминтов;
• Проведение общих эпидемиологических исследований в регионе;
• Имеющийся в анамнезе пациента высокий уровень лейкоцитоза;
• Медкомиссия для лиц, имеющих возможность заражения глистами по роду своей деятельности – работников мясокомбинатов и скотоводческих ферм.

Высокое содержание АТ к антигенам паразитов в крови бывает возможно и в случае недавно перенесённой инвазии или протекающего в настоящее время. Полученные результаты анализа интерпретируются следующим образом:

• Положительный результат анализа на антитела к гельминтам и простейшим указывает на то, что в организме имеются паразиты. Но он может оказаться и ложным в случае наличия в анамнезе пациента таких заболеваний, как цирроз печени, туберкулёз или онкология, сопровождаемых поражениями внутренних органов;
• Отрицательный результат анализа крови, выявляющего антитела к антигенам глистов, говорит о том, что их не обнаружено. Но он не исключает только что произошедшего инфицирования, так как АТ к ним вырабатываются спустя 2 недели после заражения.

Существуют такие глистные инвазии, при которых обнаружить яйца паразитов в кале практически невозможно. При них единственным способом диагностики является выявление специфических антител к антигенам паразитов. При помощи этого исследования можно определить наличие 4-х инвазий: трихинеллёз, токсокароз, эхинококкоз и описторхоза.

Для того чтобы полученный результат был максимально достоверным, к нему следует правильно подготовиться:

• Перед исследованием не рекомендуется употреблять пищу, так как оно должно проводиться натощак. Единственное, что можно, это пить простую воду;
• Физические нагрузки перед анализом крови на антитела к гельминтам также следует исключить;
• За сутки до диагностики запрещается употреблять алкогольные напитки и есть жирную, копчёную или солёную пищу.

По возможности за неделю до проведения анализа следует отменить приём любых лекарственных препаратов. В том случае, когда такой возможности нет, необходимо обязательно сообщить врачу – диагносту об употребляемых медикаментозных средствах. Если этого не сделать, кровь на антитела к антигенам паразитов покажет недостоверные результаты.
 

Источники

https://medn.ru/statyi/prostejshievkal.html 
https://gemoparazit.ru/raznoe/chto-takoe-tsisty-prostejshikh 
https://paraziti.online/glisty/prostejshie-v-kale.html 
https://files.stroyinf.ru/Data2/1/4293790/4293790006.htm 
https://gelmint03.ru/simptomy/analiz-krovi-na-antitela-k-gelmintam.html
Яндекс-картинки (открытые источники)