Candida glabrata — является причиной более тяжелых форм молочницы. Эта грибковая инфекция является основной клинической проблемой, поскольку она имеет сложную природную толерантность и может быть очень устойчива к лечению наиболее сильными противогрибковыми препаратами.

Базовая проблематика. Candida glabrata - распространенный патоген, вызывающий инвазивный кандидоз.  Candida glabrata связана с самыми высокими показателями летальностями среди инфекций не Candida albicans.  Candida glabrata sensu stricto, Candida nivariensis и Candida bracarensis вместе формируют комплекс видов Candida glabrata.  Сложно обнаружить данные виды традиционными лабораторными методами. Предлагаемое вниманию исследование установило метод быстрой идентификации представителей комплекса видов Candida glabrata на основе анализа кривой плавления с высоким разрешением (HRM) и дало оценку его практическому применению.

Методы. Область внутреннего транскрибируемого спейсера (ITS) использовалась как область целевого гена для конструирования специфичных праймеров.  HRM-анализ был представлен тремя подвидами комплекса видов Candida glabrata и негативным контролем, чтобы проверить его специфичность и чувствительность.  Для оценки практического применения процедура HRM была протестирована с клиническими изолятами и по результатам была сопоставлена с результатами секвенирования ДНК.

Высокочувствительный анализ плавления (HRM-анализ) – это метод, используемый после проведения ПЦР для установления различий в нуклеотидных последовательностях. Данный метод основан на определении различий в кривых плавления (диссоциации) ПЦР, путем окрашивания двуцепочечной ДНК специальными интеркалирующими красителями и анализе на  приборах для проведения ПЦР в реальном времени, которые позволяют наиболее точно оценить изменения температуры и провести улучшенную обработку данных. Данные анализируют и преобразовывают с помощью программного обеспечения, созданного специально для анализа HRM.


Рисунок. Процесс анализа MeltDoctor™: Подготовка к реакции – Амплификация – Проведение высокочувствительного плавления – Анализ – Отбор различающихся образцов – Получение последовательности – Характеристика различий в ДНК


Результаты. Были обнаружены различия в кривых плавления представителей комплекса видов Candida glabrata.  Негативный контроль не был увеличен, указывая на высокую специфичность метода.  Минимальные пределы обнаружения Candida glabrata sensu stricto, Candida nivariensis и Candida bracarensis были приблизительно 1×101 копий/μL или меньше.  Результаты HRM-анализа клинических изолятов были идентичны результатам секвенирования ДНК.

Выводы Метод HRM является чувствительным и может использоваться для быстрой идентификации представителей комплекса видов Candida glabrata.  Метод позволяет проводить раннее и целенаправленное лечение пациентов с инвазивным кандидозом.
 

https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC7307358/
huqian Cai, Juan Xu, Yakun Shao, Jie Gong, Fei Zhao, Lihua He, Xiaoyun Shan. Rapid identification of the Candida glabrata species complex by high-resolution melting curve analysis. J Clin Lab Anal. 2020;34:e23226. https://doi.org/10.1002/jcla.23226